A：什么是用于生产rDNA来源的蛋白质产品？

      B：rDNA来源的蛋白质产品其实就是用真核或原核细胞生产的重组DNA蛋白产品，这篇指导原则主要是介绍对于重组DNA蛋白产品的表达构建体如何进行分析。

     A：为什么要对表达构建体进行分析？

     B：表达构建体是含有重组蛋白编码序列的表达载体。表达构建体分析是为了确保产品的正确编码序列被导入到宿主细胞，并从培养开始到生产结束保持不变。因为在活细胞中产生的重组蛋白，其基因序列可能会发生突变而改变蛋白质的性质，从而对病人产生潜在的副作用。

     A：对表达构建体进行分析有哪些方法？

     B：应该说没有一种单独的试验方法能检测蛋白质所有可能发生的修饰，从原理上讲，主要有两种分析方法，包括蛋白质分析和核酸分析。蛋白质分析技术是用于估测蛋白质的氨基酸顺序和表达蛋白质的结构特征（如蛋白水解、糖基化、磷酸化、乙酰化等）。但是蛋白质分析方法不能检测到所有重组蛋白编码序列突变造成的蛋白质结构变化，所以从核酸分析中也可以得到有用的资料。核酸分析可用于验证表达构建体的编码序列和物理状态，确保被表达的蛋白有正确的氨基酸顺序。当生产细胞有多个整合的表达构建体拷贝时，并非所有的拷贝都具有转录活性，因此通过对mRNA或cDNA的分析测定转录产物本身，也许比对基因组DNA的分析更合适。对于不同的产品，核酸分析和蛋白分析的相对重要性是不一样的。需要注意的是，为确认序列所使用的各种分析方法在使用时都应该予以验证。

      A：生产重组蛋白产品，一般要先制备表达构建体，经过分析和鉴定后作为主细胞库，再通过细胞克隆制备工作细胞库。所以主细胞库是生产重组蛋白的起点，用于制备主细胞库的表达构建体的分析和鉴定就格外重要，那么分析和鉴定的内容有哪些？

      B：重组蛋白的生产应该建立在已经过研究并确定的主细胞库和工作细胞库的基础上。对主细胞库中的表达构建体的分析和鉴定应该包括以下内容：①应采用限制性内切酶图谱或其他适宜的技术分析表达构建体的拷贝数、插入或缺失情况以及整合位点的数目；②对染色体外的表达系统，应测定保留有表达构建体的宿主细胞所占的百分数；③应确证表达构建体上重组蛋白的编码序列与预期的核酸序列相一致。

     A：对于生产者，在申报这类生物制品时，需要提供哪些表达构建体的相关资料？　　

     B：具体来说，生产者应说明蛋白质编码序列的来源，包括最初获取核酸序列的细胞和用于制备核酸序列的方法。应详细说明表达构建体构建的步骤和表达构建体的组成成分，如复制起点、抗生素耐药基因、启动子、增强子的来源和功能。还应该提供质粒的详细组成图并完整标明其顺序，指出哪些区域是在质粒构建时测序的，哪些是从文献中得知的。从插入载体的目的基因编码区和相关侧翼区的核苷酸顺序，到插入的接头顺序，都应该进行DNA序列测定；还应该提供表达构建体转移到宿主细胞的方法；并详细说明用于扩增表达构建体的方法和选择生产细胞克隆的标准。（摘自中国医药科技出版社《ICH基础知识500问》）